有些樣品嚴重干擾鱟試驗生化反應,甚至使反應不能進(jìn)行。這就需要采用特殊方法對樣品進(jìn)行預處理。
1 稀釋法
相當大一部分樣品的干擾因素在一定濃度下才起作用,把樣品適量稀釋后即可按常規方法測定。如甘露醇、慶大霉素、人血白蛋白、肝素鈉和維生素C等注射液等。
2 加熱法
有些干擾因素為不耐熱的物質(zhì),將樣品在適當溫度下保溫一段時(shí)間,即可按常規方法測定。如某些血液制品和生物藥品等。
3 調整pH值法
有些樣品PH值偏高或偏低,且鱟試劑中pH緩沖劑不能將反應液調整至正常范圍。這時(shí)可用預先處理并已確認無(wú)菌無(wú)熱原的鹽酸或氫氧化鈉液調整樣品液pH。然后按常規方法測定,
如氨基酸注射液。
4 超濾─反沖法
一般中草藥注射液成份復雜,干擾因素較多,難以用普通方法加以消除,即可用超濾法。取樣品適量,進(jìn)行超濾,樣品藥液全部壓濾通過(guò)濾膜,內毒素被阻濾在超濾膜片上,再取少量無(wú)熱原水沖洗濾器、濾膜。卸開(kāi)濾器,將超濾膜反向放置濾器上,嚴密固定。再用無(wú)熱原水將內毒素從超濾膜上沖至一量瓶中,精密加水至刻度。沖洗液按常規方法測定。
5 固體樣品
若固體樣品為可溶性物質(zhì),用無(wú)熱原水溶解,按上述方法進(jìn)行干擾樣品試驗。
手術(shù)器械、一次性輸液器等固體物品的內毒素測定,用適量無(wú)熱原水按規定方法浸泡或沖洗即可。內毒素的水溶性較大,器具內表面或外表面的內毒素經(jīng)適當時(shí)間、適當溫度浸泡或沖洗,即可溶入液體,按常規方法測定。
對于復雜樣品還需將上述各法聯(lián)合應用。但不管單獨用其一法,或二法、三法聯(lián)用,在操作過(guò)程中均有可能出現抑制或增敏等干擾作用,使測定濃度高于或低于實(shí)際濃度,這時(shí)必須做回收率實(shí)驗,并根據測得的回收率求算內毒素的實(shí)際值。
同目前國前國內外各實(shí)驗室對干擾樣品的試驗報導結果差異很大,這是很正常的。因為國內外尚無(wú)規模細菌內毒素定量測定技術(shù),為此從定量測定的技術(shù)高度來(lái)規范樣品的干擾試驗是不可或缺的。